由于高效液相色谱仪(HPLC)具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。因为高效液相色谱仪都是一些很精密的仪器,有些溶剂和样品在进样之前,可能里面有些杂质或者不溶的东西,如果不用微孔滤膜过滤的话,这些东西进去可能会对仪器造成伤害,会出现堵塞柱子之类的问题。对流动相过滤必不可少。
流动相溶剂和样品过滤非常重要,它会对色谱柱、仪器起到保护作用,消除由于污染对分析结果的影响。常用液相色谱仪流动相和样品溶液过滤方法有两种,分别是溶剂过滤器和过滤头。
溶剂过滤器的原理和方法是利用滤膜过滤流动相溶液中的杂质,使用真空泵加快过滤的速率。其中,起关键性作用的就是滤膜,滤膜分为有机和水系这两种,滤膜种类的选择根 据过滤流动相溶液的性质而不同。 水系滤膜适用于水基溶液,不耐有机溶剂,具有较高的化学和热稳定性,流速快、耐酸碱能力强,具有高机械强度,对蛋白质吸 附力较低。有机滤膜为疏水性滤膜,适用于有机溶剂及空气过滤。耐酸耐碱,抗氧化剂。耐高温,强度好,化学性能稳定。不仅适用于含有酸碱性的水溶液,更适用 于含有有机溶剂,如醇类、烃类、脂类、酚类、酮类等有机溶剂。
溶剂过滤器长期用于过滤溶剂中的杂质,溶剂的质量或污染以及藻类的生长会堵塞溶剂过滤器,从而影响泵的运行,尤其水溶液或磷酸盐缓冲液。为有效防止溶剂瓶 内溶剂过滤器的堵塞,在使用过程中须严格执行溶剂过滤,避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下,尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液,存放多日的蒸馏 水及磷酸盐缓冲液不宜使用。
过滤头用于液相色谱仪样品进样系统,一般与注射器结合使用,使用方法是在注射器摄入适量样品溶液之后,将过滤头安装在注射器进口处,在注射器向仪器进样口中注射样品溶液时即可起到过滤的作用。
过滤头堵塞会影响过滤速率和效果,测试过滤头是否堵塞,可以将过滤头从瓶盖组件处拔下,使管线中充满溶剂,如果过滤头没有堵塞,溶剂会自由滴出;如果过滤头已经堵塞,则没有溶剂或只有很少的溶剂滴出。过滤头堵塞后的处理方法是 将过滤头从组件中取下,在浓硝酸(35%)中浸泡1h,然后用二次蒸馏水冲洗干净并超声处理。不锈钢材料的过滤头是可以超声清洗,玻璃材料的过滤头发生堵 塞,不推荐超声清洗,因为超声很容易破坏玻璃过滤头的过滤板,只推荐用稀硝酸(35%左右)浸泡,浸泡大约一个小时后,再用水洗净过滤头。
气泡的产生会使液相色谱仪峰面积重复性不好,灵敏度下降,压力升高等,避免吸入空气,流动相要充分脱气,提高实验精度。