高效液相色谱仪(HPLC)是分析实验室常用的测试仪器之一,其应用越来越广泛,色谱柱作为高效液相色谱仪的重要组成部件,在分析检测中能否较好的分离和测定其性能起到关键性的作用,同时也是最主要的耗材。从降本增效方面考虑,延长其使用寿命就显得尤为重要。我们需要主要注意以下几点:
一、加装保护柱
色谱柱作为高效液相色谱仪的主要耗材,价格国产的在1000元左右,进口的像资生堂大都在2000-3000元,保护柱套(一次性投资)价格在600-800元,柱芯平均一个在100-200元,随着做样次数的增加色谱柱不可避免的出现柱效下降,分离度降低,为了延迟出现这种情况,最直接有效的方法就是加装预柱。
二、经常清洗
柱子在做样过程中难免会被样品带入的杂质污染流动相大多为缓冲盐溶液,如果不及时清洗就会留在柱子当中,结晶难以清洗,建议每次清洗时间不少于2小时,最后保存在100%的甲醇或者乙腈当中。
做样时间长了以后一些不溶物和难溶物会附着在整个流路当中,或多或少会随着流动相被冲洗到色谱柱当中滞留其中,所以对色谱仪也要定期进行清洗,根据检测物质的不同用相应的试剂进行清洗。
三、流动相过滤
流动相大多用盐溶液配制,不可避免的有少量不溶物,如果不过滤,一些微小的颗粒物质就会进入色谱柱,时间一长就会造成色谱柱堵塞,根据所用色谱仪管路直径的大小选择合适的滤膜,一般是0.45μm,有些进口仪器需要用0.22μm。
四、使用进口试剂
进口试剂杂质少,不会污染色谱柱。
五、做样前后要彻底清洗
做样前由于色谱柱内甲醇或乙腈长时间放置,所在开机进行冲洗时,流速不要太大,建议用0.5ml/min的流速进行过渡。
做样后色谱柱内残留大量流动相和样品带入的杂质(参照第二条)。
六、选择合适的方法
不同的检测项目有对应不同的方法,在样品预处理过程在保留目标物质的前提下尽量将杂质去除干净,这样不仅可以保护整个流路系统,而且也降低了杂质对目标峰的干扰,进而可以提高检测的准确度。
七、色谱柱拖尾
色谱柱拖尾一般是柱头污染,具体做法如下:
1、将柱子入口(拖尾首先会污染入口)污染部分的填料去掉,尽量多去掉一些,把污染的填料全部去除;
2、去除的时候要用干净的工具,个人建议用一次性注射器;
3、经过修复的色谱柱,在使用前一定要做回收率测试,达到国标要求的80-110%,不对称因子为0.90-1.15方可投入使用。
八、检测及清洗用水
作为反相色谱用到最多的就是水,因此水的洁净程度也是影响色谱柱使用寿命的重要因素,建议用桶装的娃哈哈纯净水,如果用量较大可以考虑用纯水机制备超纯水(过滤后的超纯水建议在4小时内用完)。
九、色谱柱色谱峰前延
这种情况下柱子基本报废了,无法修复。报废的柱子也要充满100%的有机溶剂,卸下以后两端用堵头堵死,柱内未污染的填料可以用来修复拖尾的色谱柱。