13、为何出现鬼峰
①进样阀残余峰－－每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗；
②样品中未知物－－处理样品；
③柱未平衡－－重新平衡柱,用流动相作样品溶剂（尤其是离子对色谱）；
④三氟乙酸（TFA）氧化－－每天新配,用抗氧化剂；
⑤水污染（反相）－－通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水。
14、为何出现峰拖尾
①柱超载－－降低样品量，增加柱直径采用较高容量的固定相；
②峰干扰－－清洁样品，调整流动相；
③硅羟基作用－－加三乙胺，用碱致钝化柱，增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值，纯化样品；
④柱内烧结不锈钢失效－－更换烧结不锈钢，加在线过滤器，过滤样品；
⑤柱塌陷或形成短路通道－－更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件；
⑥死体积或柱外体积过大－－连接点降至最低，对所有连接点作合适调整，尽可能采用细内径的连接管；
⑦柱效下降－－用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱。
15、除了流速外，还有哪些因素能引起压力改变
改变流动相组成和温度；改变柱长、柱内径和填料粒度；柱突然阻塞压力升高（正常情况下其它条件不变柱压都是逐渐升高的）。
16、什么是强溶剂、弱溶剂
改变流动相的组成或溶剂溶剂强度就可以改变峰容量因子和保留时间。在一定条件下，减少保留时间或缩短分析时间的溶剂为强溶剂，增加保留时间或延长分析时间的溶剂为弱溶剂。
17、怎样才会使峰位发生重排
在分析多组分样品时，仅改变流动相的强度（组成百分比）而不改变其组成，一般仅仅改变所有组分的保留时间，不会发生峰位的重排。
下列条件改变可能发生峰位重排：流动相中换了强溶剂；pH值的改变；柱填料的改变；柱温的改变；流动相的组成改变（如，加入离子对试剂三乙基胺等）。
18、除了在线脱气，常用的实验室脱气方式还有哪些
加热回流脱气，脱气效果最佳，但无法保持；氦脱气，此方法脱气效果佳，能除去百分之九十以上的空气，但氦气价格太贵，所以用的不多；真空脱气，效果仅次于氦脱气，但脱气过程中容易造成样品溶液挥发损失；超声脱气，只能脱去约百分之三十的空气，但在实验室中最常用。目前还是尽量争取用在线脱气，方便且效果好。
19、评价一个色谱柱的最基本指标有那些
评价一根色谱柱的基本指标是：塔板数、峰不对称因子、柱压降、适用范围和键合相浓度以及峰容量。
20、为何出现峰展宽
①样品体积过大－－用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% ；
②在进样阀中造成峰扩展－－进样前后排出气泡以降低扩散 ；
③数据系统采样速率太慢－－设定速率应是每峰大于10点 ；
④检测器时间常数过大－－设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10% ；
⑤流动相粘度过高－－增加柱温,采用低粘度流动相；
⑥检测池体积过大－－用小体积池,卸下热交换器；
⑦保留时间过长－－等度洗脱时增加强溶剂含量,也可用梯度洗脱；
⑧柱外体积过大－－将连接管径和连接管长度降至最小；
⑨样品过载－－进小浓度小体积样品。
21、色谱双峰产生的可能及判断和处理
HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下（不包括梯度），峰型应对称而尖锐。但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。出现这种情况分为四种原因。
1)色谱柱
如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少），尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题－柱头受损或柱头固定相变脏或流失。如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。当然不反冲，正冲有时也会正常的。如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头固定相变脏或流失可能性更大，这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同时不能老干那种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。
2)溶剂极性及进样量
许多HPLC分析者对此可能不以为然，一般的 HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。当用溶剂极性强度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如定量管为20ul，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一样），且拖尾，保留时间会提前（相对进样量少而言），将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。这是样品的溶剂与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。上面提到进样量造成双峰的一个原因，另一个原因是，进样量不一定大，但绝对量很大，色谱图上的双峰紧靠在一起，基本上齐高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色谱柱问题）。将样品稀释再进样就可以了，这是由于进样量过大，色谱柱过载造成的。
3)样品的特性
有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构体无法分开，而是以一个动态平衡存在。在色谱分析时，在一个特定的条件下，一种物质将出现双峰，双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾，条件稍一变化，尤其pH，双峰现象将消失，如，红霉素等。有的样品紫外的色谱图上看不到双峰，但在LC-MS下，用质谱检测器，其质谱的总离子流图上较明显，例如，我分析过的农药啶虫眯（吡虫清）。
4)参数
记录的参数一般都内定的，不必修改，但GC和HPLC的参数是不完全一致的，例如，C－R3A数据记录仪上的一般记录时间间隔GC为2ms，HPLC为5ms，如果记录间隔时间缩短，一个峰将变为二个峰或更多。
22、为什么在实验过程中有时会出现倒峰
所用的流动相在检测波长下有吸收，而进在此波长下没有吸收或吸收低于流动相的溶液，在流动相中会出现洞穴，通过柱后出现倒峰。
23、为何会出现“胖”峰和平头峰，怎样避免
用比流动相强度大的大体积样品进样，通常会损害色谱图的质量，而出现“胖”峰和平头峰。应遵循下列规则选用溶剂溶解样品：A最好用流动相溶解样品进样。B用大体积弱溶剂溶解样品，如反相色谱中用水溶解样品进样，主要缺点是每次进样后在色谱图的开头出现大的负峰，有时还波及到样品峰。C需要时用强溶剂溶解进样。
24、前延峰的发生及处理
因柱温问题很易引起前延峰，有些样品在常温下分离可见前延峰，提高温度后前延峰的现象消失。在离子对色谱中，前延峰的另一个原因是用非流动相作样品溶剂。因此在离子对色谱中要求仅用流动相溶解样品，而且进样量不要太大，否则会导致前延峰或其它问题。在RP-HPLC中样品溶液的强度大于流动相引起前延峰。增加流动相的强度，减少样品溶液的强度，在离子对色谱中增加离子强度，可以克服前延峰的效应。此外使用流动相溶解样品是解决的最简单实用的方法。
25、如何简单判断比例阀是否内漏
设定泵使用一个单独通路（A），打开Purge阀，流速5mL/min，提起其他溶剂瓶内的溶剂过滤头直至离开液面，观察这些通路（B、C、D）内的溶剂是否随着流动，正常时均不应流动。
26、峰变宽的原因
A在使用过程中柱本身退化，逐渐降低柱效。
B柱外峰宽效应。一根很好的专用柱用于另一液相色谱系统引起塔板数降低，说明新系统有很大的柱外峰宽效应。
C化学效应，多数是流动相和固定相相互作用所致，改变流动相可使宽峰有所改善。
27、柱平衡慢的常见原因
柱平衡慢的常见原因是，组分在旧的或新的流动相中对柱吸附强，或者在新的流动相中浓度小甚至为零。A流动相含有胺改良剂；B流动相含有离子对试剂；硅胶柱；流动相中有四氢呋喃。可考虑采用专用柱用于特殊的方法，不用时将柱折下来，注满适当的溶剂或流动相，密封保管，不再作其它的分析。
28、对内标物的要求有哪些
A.内标物的结构或理化性质应与被分析组分相似或相近；
B.内标物的保留值应稍大于或小于被分析物的保留，不能相差过大；
C.内标物的峰要与所有被分析物的峰有良好的分离度（R大于1.5），不能让内标物成了干扰物；
D.无结构相似的内标物，可用保留相近的内标物；E仪器对分析物的响应与内标基本一致，出峰面积大小不能相差悬殊。
29、什么是HPLC的“无限直径效应”
在HPLC分析中由于使用了高效微粒固定相及高压流动相，样品以柱塞式注入色谱柱后，因柱的阻力大，样品分子在柱中的分子扩散很小，直至它从色谱柱流出也未与色谱柱内壁接触，因而引起的色谱峰形扩展很小，能保持高柱效。
30、如何评价一台检测器
A.噪声：通常噪声是指由仪器的电气元件、温度波动、电压的线性脉冲以及其他非溶质作用产生的高频噪声和基线的无规则波动；
B.基线飘移：漂移是基线的一种向上或向下的缓慢移动，可在较长时间（0.5~1h）内观察到。它可掩蔽噪声和小峰。漂移与整个液相色谱系统有关，而不仅是由检测器引起的；
C.灵敏度（最小检出浓度或最小检出量）：在一个特定分离工作中，检测器是否有足够的灵敏度是十分重要的。当比较检测器时，常使用敏感度这一性能指标。敏感度，即指信号与噪声的比值（信噪比）等于2时，在单位时间内进入检测器的溶质的浓度或质量；
D.线性范围：在进行定量分析时，希望检测器有宽的线性范围，以便在一次分析中可同时对主要组分和痕量组分同时进行检测；
E.检测器的池体积：它应小于最早流出的死时间色谱峰的洗脱体积的1/10，否则会产生严重的柱外谱带扩展。
以上就是谱析色谱工程师对高效液相色谱仪HPLC 30个常见问题对策介绍，你是否对液相色谱仪使用有了新的启发和思考？如还有疑惑和难点请致电公司色谱技术人员，亦可登录公司网站http://www.pxfxyq.com在线咨询工作人员，我们将一一为您解答。
